通用组织单细胞解离试剂盒

通用组织单细胞解离试剂盒

一、产品名称

通用组织单细胞解离试剂盒（货号：YK-022）

二、产品概述

本试剂盒采用温和复合酶体系，可快速、高效将哺乳动物新鲜组织解离为高活性、高活率、低碎片的单细胞悬液，适用于单细胞测序、流式细胞术、细胞培养、细胞分选等下游实验。适配肝、肾、脾、肺、淋巴结、脂肪、肌肉、皮肤及多数实体瘤组织。

三、试剂盒组成（20次反应）

• 复合解离酶干粉（复合酶）：20T

• 干粉溶解液

• 说明书：1份

四、储存与有效期

• 储存：-20℃避光，避免反复冻融

• 有效期：12个月；解冻后2-8℃可保存4周

五、所需自备材料

• 预冷PBS、无菌离心管、15/50 mL离心管

• 70 μm细胞滤网、眼科剪/镊

• 低温离心机、37℃恒温摇床/水浴

• 红细胞裂解液（可选）

六、实验步骤（全程冰上/低温操作）

1. 样本处理

取50–100 mg新鲜组织，预冷PBS漂洗去血污；剪至1–2 mm³碎块，转入15 mL离心管。

2. 解离液配制

• 溶解酶干粉：首次启用试剂盒时执行该操作步骤。将A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液枪取B瓶中的溶解液反复吹打A瓶中的酶干粉并转移至B瓶中，必要时可将枪头口用剪刀剪大，确保A瓶中酶干粉全部转移至B瓶中；随后盖紧B瓶瓶盖上下颠倒B瓶直至酶干粉完全溶解，必要时可放置摇床上摇晃至完全溶解，完全溶解的酶溶液呈现清澈微棕色。

3. 组织解离

加入配好的解离液，37℃、180–220 rpm振荡消化15–30 min；每5min轻轻吹打一次。

• 疏松组织：15–20 min

• 致密/肿瘤组织：25–40 min

4. 终止消化

加入等体积终止液（或PBS），轻轻吹打混匀终止反应。

5. 过滤与离心

悬液经70 μm滤网过滤去除碎片；4℃、300×g离心5 min，弃上清。

6. 重悬与清洗

沉淀用清洗缓冲液或PBS重悬，重复离心1次；最终用适量缓冲液重悬，即得单细胞悬液。

7. 可选：裂红

脾、血供丰富组织：加红细胞裂解液冰浴5 min，PBS终止离心。

七、结果判断

• 细胞活率≥85%，无明显团块、碎片少，可直接用于下游实验。

八、注意事项

1. 样本必须新鲜，离体后尽快处理，避免坏死。

2. 严格控制消化时间，过度消化降低活率。

3. 全程无菌操作，避免污染。

4. 酶组分避免反复冻融，建议分装保存。

5. 本产品仅用于科研，不可用于人体/临床诊断。

九、常见问题与解决

• 细胞团块多：延长吹打、增加过滤次数、缩短消化时间。

• 活率低：消化过度/温度过高；全程控温、缩短消化。

• 碎片多：机械吹打过强，改用轻柔吹打。