小分子靶点验证pulldown-Wb

Candidate小分子靶点验证（pulldown-Wb）技术，是利用小分子药物修饰标签，通过与细胞裂解液样等样本孵育，pulldown实验捕获到与之相互作用的蛋白质，然后经过western blot实验。

方案一：CCCP生物活性天然产物被共价固定在生物相容性惰性树脂（如琼脂糖和磁珠）。

方案二：ABPP活性光亲和探针化学蛋白质组学技术

两者区别如下图：

Signal Transduction and Targeted Therapy volume 5, Article number: 72 (2020) 

服务流程：

1. 小分子结构评估：小分子能否成功偶联到纳米材料表面，取决于分子本身结构、药效位点、偶联方法等因素，因此评估小分子结构和药效位点至关重要。

2. 项目开展

案例一

客户单位：大连医科大学

评估结果：草质素分子经过评估，多个羟基位点均具有活性，传统biotin标记方法会对多个药效位点羟基同时被使用，导致标记后的草质素分子无法与靶分子有效结合；而candidate纳米磁珠表面一个羧基分子仅与草质素表面一个羟基结合，因而最大限度上保留了草质素的药效活性

案例二

客户单位：上海市肺科医院

评估结果：该药物分子经过评估，NH2位点是活性位点，更改药物分子后可实现偶联目标

案例三

客户单位：上海市肺科医院

评估结果：该药物分子经过评估，NH2位点活性较低，无法实现偶联，更改药物分子可实现偶联目标

案例四

客户单位：复旦大学附属华山医院

评估结果：该结构中酚羟基均与药物活性相关，传统biotin标记方法会对多个药效位点羟基同时被使用，导致标记后的大黄素分子无法与靶分子有效结合；而candidate纳米磁珠表面一个羧基分子仅与大黄素表面一个羟基结合，因而最大限度上保留了大黄素的药效活性

案例五

客户单位：南京中医药大学

评估结果：该药物分子结构中，酚羟基活性大于醇羟基，因此需评估靶分子与药物的哪个羟基位点发挥作用，方可开展偶联工作

项目开展：

1.设计偶联方案（提供20-50mg小分子（干粉），纯度≥95%）

2.偶联结果评估：

zeta粒度电位仪检测纳米材料表面药物载药情况 

3.准备细胞裂解液（细胞裂解液体积＞1ml，总蛋白浓度大于2mg/ml）

4.药物与细胞裂解液孵育

5.wb实验鉴定