小分子Pulldown Ms靶点筛选
Candidate小分子靶点捕获技术介绍
一、服务简介
Candidate小分子靶点筛选，是利用小分子药物修饰标签，通过与细胞裂解液等样本孵育，pulldown捕获到与之相互作用的蛋白，然后经质谱鉴定生物学信息。以下是现有常见三种小分子修饰用于靶点筛选：
ABPP技术(activity-based protein profiling）
原理步骤： 药物分子光亲和偶联 
点击化学
2. 生物素标记技术
原理步骤： 药物生物素标记
药物探针孵育、富集
3. 磁珠偶联法（CCCP）
原理步骤： 药物磁珠标记
药物探针孵育、富集
二、服务流程
（1）提供药物分子名称或Cas号，免费评估偶联策略（2-3工作日）
（2）提供30-50mg药物干粉（纯度95%以上）开展标记实验（2-3周）
（3）提供细胞裂解液样本，开展pulldown实验（1周）
（4）质谱鉴定（2-3周）
（5）数据处理及生信分析（1-2周）
三、合作案例
Candidate已和国内多家知名研究机构合作，共同完成数十个药物靶点筛选和药物胞内成像研究。
北京中医药大学——去氧紫草素靶点筛选
上海中医药大学附属龙华医院——黄芪皂苷靶点筛选
陕西中医药大学——羟基红花黄色素A靶点筛选
上海中医药大学——木通苯乙醇苷B
上海中医药大学附属曙光医院——金合欢素胞内成像
中国科学院上海药物研究所——人参三醇靶点筛选
中蒙医药研究院——消旋山莨菪碱靶点筛选、毛蕊花靶点筛选
四、项目示例结果：
（采用细胞为HepG2细胞）
从左至右依次为：1、marker 2、细胞裂解液（浓度为1.85mg/ml）
9、marker 10、marker
实验组1：3、药物beads与裂解液孵育后beads上样结果
4、药物beads与裂解液孵育后上清上样结果
对照组：（用150um药物预先封闭细胞裂解液3h）
5、药物beads与裂解液孵育后beads上样结果
6、药物beads与裂解液孵育后上清上样结结果
实验组2：7、药物beads与裂解液孵育后beads上样结果
8、药物beads与裂解液孵育后上清上样结果
结果分析：通过上述结果，发现偶联药物磁珠捕获到目的蛋白；而药物封闭组由于提前用游离的药物和细胞裂解液中目的蛋白结果，进而与偶联药物的磁珠竞争结合目的蛋白，因此条带有差异。
